Citometría de flujo
La misión de la Unidad es poner a disposición de los investigadores del IMIBIC y entorno hospitalario, de instituciones públicas y sector privado un equipamiento de altas prestaciones que cubra un amplio espectro de aplicaciones en el campo de la Citometría de flujo, además de, proporcionar experiencia técnica y formación. La Unidad también proporciona soporte científico-técnico sobre diseño experimental, preparación de muestras, análisis de datos de citometría e interpretación de resultados.
La unidad de Citometría de flujo dispone de un Sistema de Gestión de Calidad conforme a la Norma de Calidad ISO 9001:2015.
Coordinación a cargo de:
Esther Peralbo Santaella, PhD
RESPONSABLE DE UNIDAD. ESPECIALISTA TÉCNICA DE CITOMETRÍA DE FLUJO
Fundamentos de la Citometría de flujo
La Citometría de flujo es una potente tecnología que permite medir y analizar de forma rápida y simultánea, múltiples características o parámetros físicos y/o químicos (estructurales o funcionales) de partículas únicas en suspensión, normalmente células, cuando se mueven por una corriente de fluido a través de un haz de luz láser. La determinación de dichas características se basa en medidas de la dispersión de la luz láser incidente y de la fluorescencia emitida por cada partícula o célula, utilizando un sistema de acoplamiento óptico-electrónico.
El denominado Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) es un tipo especializado de Citometría de flujo, que permite separar y aislar célula a célula, subpoblaciones celulares presentes en una suspensión heterogénea, basándose en las características de dispersión de la luz y de fluorescencia de cada una de ellas.
Aplicaciones de la Citometría de flujo
Existe un amplio rango de aplicaciones en Citometría de flujo, entre éstas se encuentran:
Análisis multicolor de antígenos de superficie e intracelulares mediante el uso de anticuerpos marcados con fluorocromos.
Viabilidad celular.
Ensayos de apoptosis (integridad de la membrana plasmática, función mitocondrial, actividad caspasa, fragmentación del ADN.
Análisis de contenido de ADN y ciclo celular.
Ensayos funcionales como: proliferación celular (ej. CFSE), producción de ROS, medidas de potencial de membrana, flujo de Calcio, medidas de pH intracelular, etc.
Análisis de expresión génica mediante genes reporteros.
Flow-FISH y ensayo PrimeFlow RNA.
Análisis de microvesículas.
Análisis de microorganismos.
Separación y aislamiento de subpoblaciones celulares o células únicas, y clonaje celular mediante FACS Cell Sorting.
Equipamiento e instalaciones
• BD LSRFortessa SORP (Becton Dickinson)
Última actualización: 2021
Equipado con 5 láseres (355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm y 640 nm). Permite el análisis simultáneo de 20 parámetros, 18 fluorescencias más los parámetros de dispersión FSC y SSC. (configuración óptica)
• BD FACSCanto II (Becton Dickinson)
Última actualización: 2021
Equipado con 3 láseres (405 nm, 488 nm y 633 nm). Permite el análisis simultáneo de 10 parámetros, 8 fluorescencias más los parámetros FSC y SSC. Equipado con cargador carrusel automático de 40 tubos. (configuración óptica)
• BD FACSCalibur (Becton Dickinson)
Equipado con 1 láser (488 nm). Permite el análisis simultáneo de 5 parámetros, 3 fluorescencias más los parámetros FSC y SSC. (configuración óptica)
• BD FACSAria III (Becton Dickinson)
Última actualización: 2014
• Equipado con 3 láseres (407 nm, 488 nm y 633 nm). Permite el análisis simultáneo de 13 parámetros, 11 fluorescencias más los parámetros FSC y SSC.
• Nozzles disponibles: 70µm, 85µm y 100µm.
• Equipado con sistema de evacuación de aerosoles (AMO: Aerosol Management Option).
• Capacidad de separación simultánea de hasta 4 subpoblaciones y de célula única. Las células pueden ser recogidas en tubos (microtubos, 12 x 75 mm and 15 mL), placas (6, 24, 48, 96 y 384 pocillos), y sobre portas (equipado con ACDU).
• Control de temperatura en el punto de inyección de la muestra (software ajustable), y en el punto de recogida de las células separadas (sistema de recirculación de agua).
• Estación de trabajo PC
Con acceso al software de análisis de Citometría BD FlowJo v10.